Propagacion invitro de lulo (Solanum quitoense)

PROPAGACIÓN IN VITRO DE LULO (Solanum quitoense) A PARTIR DE SEMILLA PARA LA FORMACIÓN DE RAÍZ.

Autor: Fabián García

Palabras Clave: Biotecnología Vegetal, Crecimiento, desarrollo, Raíz, lulo, Medio de cultivo, in vitro, plántula, Propagación, adaptación, semilla.

RESUMEN

Se llevó a cabo la propagación in vitro de lulo (Solanum quitoense), con el fin de obtener de una semilla una planta bien desarrollada y libre de hongos. El establecimiento se realizó en medio de cultivo de Murashige y Skoog (MS), suplementado con tiamina (3mg/l), ga3 (3mg/l), carbón activado, sacarosa (30g/l) y agar (13g/l). Los resultados obtenidos fueron entre los  seis y ocho posteriores a la siembra. La longitud y altura de plántula fue entre 1cm y 1.5cm, creciendo todas las plántulas sanas. Se realizaron observaciones y mediciones semanales después de la siembra y durante su desarrollo, para el registro de resultados.

ABSTRACT

I was carried out in vitro propagation of lulo (Solanum quitoense), in order to obtain a well-developed seed-free plant establishment hongs. The was performed in culture medium of Murashige and Skoog (MS) supplemented with thiamine (3mg / l), ga3 (3mg / l), activated carbon, sucrose (30g / l) and agar (13g / l). The results obtained were between six and eight days after sowing. The length and seedling height was between 1cm and 1.5cm, all healthy seedlings growing. Weekly observations and measurements after planting and were made during its development, for recording results.

INTRODUCCIÓN

El lulo es una de las frutas andinas con mayor potencialidad, dada su amplia aceptación en los mercados nacionales, por la calidad de sus frutos, valor nutritivo y múltiples usos en la agroindustria. (Corpoica, 1998)  

El caso del lulo es limitante  donde la posibilidad de exportar en fresco es prácticamente inexistente. Es así como las opciones se limitan a productos con valor agregado, que en el caso de esta fruta en particular se centra en pulpa y salsa.  Actualmente Colombia le vende a países de Europa, Japón y Corea entre 36 y 120 toneladas anuales. Esta cifra varía porque el volumen de exportación está sujeto a la disponibilidad de producción. (La republica, 2012)

Un principal limitante en su cultivo es el ataque de plagas y enfermedades que requieren de costos agroquímicos para su control.

El lulo requiere sombría, fertilización y humedad. Es una planta semi-silvestre en vía de domesticación que al cambiar su habitad natural, sembrándola a plena exposición solar reduce su periodo vegetativo y presenta un gran número de problemas fitosanitarios. (Corpoica, 1998)

Para evitar los problemas fitosanitarios se han implementado metodos de micropropagacion in vitro lo cual le asegura asepsia , alto nivel de calidad y una posible solucion al modo de produccion de lulo a gran escala, por lo tanto este estudio se ha relizado enfocado en la descripcion de una tecnica de obtencion in vitro  de lulo para su posterior uso en la industrica de exportacion del lulo (Solanum quitoense).

MATERIALES Y MÉTODOS.

Establecimiento del explante

Se compraron lulos maduros para poder obtener de ellos las semillas que fueron sembradas en el medio (M&S).

Medio de cultivo.

El medio de cultivo utilizado para la propagación fue el de Murashige y Skoog (1962) suplementado con tiamina (3mg/l), Ga3 (3mg/l), carbón activado, sacarosa (30g/l) y agar (13g/l). El PH fue ajustado a 5.8 con una solución básica de Hidróxido de sodio (NaOH), la esterilización del medio se llevó a cabo en autoclave aproximadamente durante 20 minutos a 15 libras de presión y 121 °C de temperatura.

COMPLEMENTOS PARA  MEDIO DE CULTIVO PARA LULO
COMPUESTO	CANTIDAD
Tiamina	3mg/l
Ga3	3mg/l
Carbón activado
Sacarosa	30g/l
Agar	13g/l

Desinfección de explantes.

La desinfección del explante se realiza de la siguiente manera: Los explantes se lavan en solución de agua jabonosa (1g/l) con un a agitación constante, durante 10 minutos,  un posterior enjuague con agua del grifo, luego se prepara una solución de Hipoclorito de sodio (NaClO) al 1.5 %, los explantes se mantienen en esta concentración, con una agitación constante durante 12 minutos, finalmente se realizan 3 enjuagues con ADE (Agua destilada estéril) Cada uno de 1 minuto. Quedando así los explantes listos para la siembra.

Siembra

La siembra se realizó así: 1) La siembra de las semillas se hizo en condiciones de asepsia, con todo el material estéril, en presencia de mechero de alcohol, y atomizador con desinfectante. Se extrajeron las semillas en caja de Petri con papel absorbente y con pinza se distribuyeron uniformemente sobre el medio de cultivo. Se  cerraron, rotularon y llevaron al cuarto de crecimiento a una temperatura de 25 °C.

       1)    Medios de cultivo en cuarto de crecimiento

MICROPROPAGACIÓN

Al cabo de 3 semanas había entre 10 y 15  tallos por frasco. En condiciones de asepsia estos se tomaron, se extrajeron y se sembraron en un medio con tiamina (3mg/l), ga3 (3mg/l), carbón activado, sacarosa (30g/l) y agar (13g/l). Los frascos se cerraron y rotularon, se llevaron al cuarto de crecimiento con 25 °C y Horas Luz.

                                                          1)     Lulo en su segunda semana      

                                                                                      2 ) Desarrollo de más tallos

}

                                                                                                          3) Aparición de nuevas hojas.

ADAPTACIÓN O ACLIMATACIÓN

El proceso de adaptación se realiza de la siguiente forma, se de contar con un buen número de plántulas listas para multiplicar a las cuales en su respectivo frasco se les agrega agua destilada para aflojar el Agar y así sea más fácil soltar las raíces, luego se extraen las plantas de lulo y se siembran en vasos plásticos (perforados en su parte inferior) con sustrato; Este sustrato está compuesto por tierra negra estéril en un 50% y  turba estéril en un 50 % ; luego se hidrata con ADE, se sella con un segundo vaso plástico superior y se rotula.

                                                                                                        2) lulo adaptado 

A la semana de la siembra se adiciona M&S al 50% y así cada semana  durante 30 días, es necesario revisar  y ajustar la hidratación del sustrato, posteriormente se perfora el vaso superior y así se hará gradualmente para que la planta se adapte al clima del ambiente.

            1)     Lulo desarrollado.

Al mes se les quita el vaso superior y se dejaran solo con el sustrato, se les aplicaba constantemente agua para que estuvieran hidratadas y sanas para su desarrollo y crecimiento

                2) Lulo listo para traspasar a campo.

Algunas crecieron mucho y son trasladadas a bolsas y luego de un tiempo las traspasamos a tierra en nuestra cama de cultivo. 

RESULTADOS REGISTRO DE DATOS

Propagación In vitro

Solo se realizó una siembra y en tabla siguiente se puede evidenciar los resultados obtenidos 

fecha de revisión	número de días que se requirieron para el proceso de germinación	número de hojas	tiempo necesario para el desarrollo de las hojas	longitud de raíz y número de días	longitud del tallo y número de días
P1 13/02/2014	15 días	4	12 días	1cm	2cm
P2	15 días	5	12 días	1cm	2,5cm
P1 21/02/2014	8 días	4	7 días	1.5cm	3cm
p2	8 dias	3	7 días	1.5cm	3cm
P1 05/03/2014	8 dias	5	7 días	1.5cm	2cm
P2	8 dias	6	7 días	1.5cm	3cm
P1 13/03/2014	10 dias	4	5 días	2cm	2,5cm
P2	8 dias	3	5 días	2cm	1,5cm

Promedios de Propagación

fecha de revisión	número de días que se requirieron para el proceso de germinación	número de hojas	tiempo necesario para el desarrollo de las hojas	longitud de raíz y número de días	longitud del tallo y número de días
13/02/2014	15 días	4.5	12 días	1 cm	2.25 cm
21/02/2014	8 dïas	3.5	7 días	1.5 cm	3 cm
05/03/2014	8 días	5.5	7 días	1.5 cm	2.5 cm
13/03/2014	9 dias	3.5	5 días	2 cm	2 cm

Adaptación

fecha de revisión	número de días que se requirieron para el proceso de crecimiento	número de hojas	tiempo necesario para el desarrollo de las hojas	longitud de raíz	longitud del tallo
p1 17/07/2014	20 días	5	10 días	3cm	6cm
p2	20  días	4	10 días	4,5cm	5cm
p1 24/07/2014	10 días	6	8 días	-	6.7cm
p2	10 días	5	8 días	-	5,5cm
p1 05/08/2014	10 días	6	8 dias	-	6,9cm
p2	10 días	5	8 días	-	6cm
p1 12/08/2014	15 dias	6	10 dias	-	7,2cm
p2	15 días	6	8 dias	-	7cm

 DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Los resultados obtenidos de la propagación, Micropropagación y adaptación (Physalis peruviana L.) in vitro dan a analizar que el medio Murashige y skoog (1962) al 100% es aceptable, ya que en la primera fase se observó que los medios germinaron sanos hasta tal punto que la mitad tuvo una oxidación, según Novoa et al y Turrens[1], la oxidación es un fenómeno que se produce por el desbalance entre las reacciones pro-oxidación (excesiva formación de ROS y, o RNS o de naturaleza enzimática) el cual se manifiesta como una coloración amarillenta en las hojas y de la fase dos se observó que a las dos semanas las plantas germinaron sin complicaciones, y en su adaptación se observó que tanto el sustrato aplicado como los nutrientes fueron efectivos, porque se desarrollaron rápidamente y sin ninguna complicación.

CONCLUSIONES

●     Se pudo establecer un protocolo para la producción eficiente de lulo por semillas.

●     los componentes que se le aplicaron al medio de cultivo según nuestros resultados fueron muy buenos ya que le brindaron a las plantas nutrientes para su debido crecimiento y desarrollo.

●     Algunas de las plántulas presentaron oxidación e invasión de hongos y otros patógenos debido a una mala desinfección del área de trabajo y a la contaminación que se encuentra en el ambiente.

●     Pudimos duplicar la producción de lulo inicial,  gracias  a que las plántulas crecieron sanas, y así se pudo realizar una muy buena Micropropagación.

●     En la adaptación se observó que los nutrientes aplicados al sustrato fueron eficaces, debido a esto la planta creció muy rápido y muy sana.

RECONOCIMIENTOS

Al colegio manuelita Sáenz por su apoyo financiero y también a nuestros Instructores que nos asesoraron en la parte de Biotecnología Liceth Cabrejo y Rubén Luengas.

REFERENCIAS

http://ciat-library.ciat.cgiar.org/Articulos_Ciat/poster_segovia_lulo.pdf

http://www.corpoica.org.co/sitioweb/Archivos/Publicaciones/Lulo.pdf

TRABAJOS CITADOS

Corpoica. (Julio de 1998). www.corpoica.org.co. Recuperado el 22 de Octubre de 2014, de http://corpomail.corpoica.org.co/BACFILES/BACDIGITAL/24467/s2d15988293115C83EFCE4F7B6980B9D66F_1.pdf

La republica. (23 de Julio de 2012). La republica. Recuperado el 23 de octubre de 2014, de La republica: http://www.larepublica.co/agronegocios/europa-corea-y-jap%C3%B3n-los-destinos-de-exportaci%C3%B3n-del-lulo-colombiano_16099

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[1] Novoa et al y Turrens (2001) (2003),http://www.mag.go.cr/rev_meso/v20n01_153.pdf.